Շնորհակալություն Nature.com այցելելու համար:Ձեր օգտագործած բրաուզերի տարբերակը ունի սահմանափակ CSS աջակցություն:Լավագույն փորձի համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել թարմացված դիտարկիչ (կամ անջատել Համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer-ում):Միևնույն ժամանակ, շարունակական աջակցությունն ապահովելու համար մենք կայքը կներկայացնենք առանց ոճերի և JavaScript-ի:
Toxoplasma gondii-ն ներբջջային նախակենդանի մակաբույծ է, որը կարգավորում է վարակված հյուրընկալողի միկրոմիջավայրը և, ինչպես հայտնի է, կապված է ուղեղի ուռուցքի աճի հաճախականության հետ:Այս ուսումնասիրության մեջ մենք ենթադրում ենք, որ Toxoplasma վարակի էկզոսոմային miRNA-21-ը նպաստում է ուղեղի ուռուցքի աճին:Բնութագրվել են տոքսոպլազմայով վարակված BV2 միկրոգլիայի էկզոսոմները և հաստատվել է U87 գլիոմայի բջիջների ներքինացումը:Էկզոսոմային միկրոՌՆԹ-ի արտահայտման պրոֆիլները վերլուծվել են՝ օգտագործելով միկրոՌՆԹ-ի և միկրոՌՆԹ-21A-5p զանգվածներ՝ կապված Toxoplasma gondii-ի և ուռուցքների տեսակավորման հետ:Մենք նաև ուսումնասիրեցինք U87 գլիոմայի բջիջներում ուռուցքի հետ կապված գեների mRNA մակարդակները՝ փոխելով miR-21 մակարդակները էկզոսոմներում և էկզոսոմների ազդեցությունը մարդու U87 գլիոմայի բջիջների տարածման վրա:Toxoplasma gondii-ով վարակված U87 գլիոմայի բջիջների էկզոսոմներում ավելանում է միկրոՌՆԹ-21-ի էքսպրեսիան և նվազում է հակաուռուցքային գեների ակտիվությունը (FoxO1, PTEN և PDCD4):BV2-ից ստացված էկզոսոմները, որոնք վարակված են Toxoplasma-ով, առաջացնում են U87 գլիոմայի բջիջների բազմացում:Էկզոսոմները առաջացնում են U87 բջիջների աճ մկան ուռուցքային մոդելում:Մենք առաջարկում ենք, որ տոքսոպլազմայով վարակված BV2 միկրոգլիաներում էկզոսոմային miR-21-ի ավելացումը կարող է կարևոր դեր խաղալ որպես բջիջների աճի խթանիչ U87 գլիոմայի բջիջներում՝ նվազեցնելով հակաուռուցքային գեները:
Ենթադրվում է, որ 2018 թվականին աշխարհում ախտորոշվել է առաջադեմ քաղցկեղի ավելի քան 18,1 միլիոն դեպք, որոնցից տարեկան ախտորոշվում է կենտրոնական նյարդային համակարգի մոտ 297,000 ուռուցք (բոլոր ուռուցքների 1,6%-ը):Նախորդ հետազոտությունները ցույց են տվել, որ մարդու ուղեղի ուռուցքների զարգացման ռիսկի գործոնները ներառում են տարբեր քիմիական արտադրանքներ, ընտանեկան պատմություն և գլխի թերապևտիկ և ախտորոշիչ սարքավորումների իոնացնող ճառագայթում:Այնուամենայնիվ, այս չարորակ նորագոյացությունների ստույգ պատճառը անհայտ է:Աշխարհում քաղցկեղի բոլոր տեսակների մոտ 20%-ը առաջանում է վարակիչ նյութերի կողմից, ներառյալ վիրուսները, բակտերիաները և մակաբույծները3,4:Վարակիչ պաթոգենները խաթարում են ընդունող բջիջի գենետիկական մեխանիզմները, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ի վերականգնումը և բջջային ցիկլը, և կարող են հանգեցնել քրոնիկ բորբոքման և իմունային համակարգի վնասմանը5:
Մարդկային քաղցկեղի հետ կապված վարակիչները ամենատարածված վիրուսային պաթոգեններն են, ներառյալ մարդու պապիլոմավիրուսները և հեպատիտ B և C վիրուսները:Մակաբույծները կարող են նաև պոտենցիալ դեր խաղալ մարդու քաղցկեղի զարգացման գործում:Մի քանի մակաբույծ տեսակներ՝ Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis և Hymenolepis nana, ներգրավված են մարդու քաղցկեղի տարբեր տեսակների մեջ 6,7,8:
Toxoplasma gondii-ն ներբջջային նախակենդանի է, որը կարգավորում է վարակված հյուրընկալող բջիջների միկրոմիջավայրը:Ենթադրվում է, որ այս մակաբույծը վարակում է երկրագնդի բնակչության մոտավորապես 30%-ին՝ վտանգի տակ դնելով ողջ բնակչությանը9,10:Toxoplasma gondii-ն կարող է վարակել կենսական օրգանները, ներառյալ կենտրոնական նյարդային համակարգը (CNS) և առաջացնել լուրջ հիվանդություններ, ինչպիսիք են մահացու մենինգիտը և էնցեֆալիտը, հատկապես իմունային անբավարարված հիվանդների մոտ9:Այնուամենայնիվ, Toxoplasma gondii-ն կարող է նաև փոխել վարակված հյուրընկալողի միջավայրը՝ կարգավորելով բջիջների աճը և իմունային պատասխանները իմունային կոմպետենտ անհատների մոտ՝ հանգեցնելով ասիմպտոմատիկ քրոնիկ վարակի պահպանմանը9,11:Հետաքրքիր է, որ հաշվի առնելով T. gondii-ի տարածվածության և գլխուղեղի ուռուցքի հաճախականության միջև փոխկապակցվածությունը, որոշ զեկույցներ ենթադրում են, որ in vivo հյուրընկալող միջավայրի փոփոխությունները, որոնք պայմանավորված են քրոնիկ T. gondii վարակով, նման են ուռուցքային միկրոմիջավայրին:
Էկզոսոմները հայտնի են որպես միջբջջային հաղորդակցիչներ, որոնք կենսաբանական բովանդակություն են հաղորդում, ներառյալ սպիտակուցները և նուկլեինաթթուները, հարևան բջիջներից16,17:Էկզոսոմները կարող են ազդել ուռուցքի հետ կապված կենսաբանական գործընթացների վրա, ինչպիսիք են հակաապոպտոզը, անգիոգենեզը և մետաստազը ուռուցքի միկրոմիջավայրում:Մասնավորապես, miRNA-ները (miRNAs), մոտ 22 նուկլեոտիդների երկարությամբ փոքր ոչ կոդավորող ՌՆԹ-ները, հետտրանսկրիպցիոն գեների կարևոր կարգավորիչներ են, որոնք վերահսկում են մարդու mRNA-ի ավելի քան 30%-ը miRNA-ի կողմից առաջացած խլացման համալիրի (miRISC) միջոցով:Toxoplasma gondii-ն կարող է խաթարել կենսաբանական գործընթացները՝ վերահսկելով miRNA-ի արտահայտումը վարակված տանտերերի մոտ:Հյուրընկալող miRNA-ները պարունակում են կարևոր ազդանշաններ հյուրընկալող կենսաբանական գործընթացները կարգավորելու համար՝ մակաբույծի գոյատևման ռազմավարությանը հասնելու համար:Այսպիսով, T. gondii-ով վարակվելուց հետո հյուրընկալող miRNA-ի պրոֆիլի փոփոխություններն ուսումնասիրելը կարող է օգնել մեզ ավելի հստակ հասկանալ տանտիրոջ և T. gondii-ի փոխազդեցությունը:Իսկապես, Thirugnanam et al.15-ը ենթադրեց, որ T. gondii-ն նպաստում է ուղեղի քաղցկեղի առաջացմանը՝ փոխելով դրա արտահայտությունը հատուկ հյուրընկալող miRNA-ների վրա, որոնք կապված են ուռուցքի աճի հետ և պարզեցին, որ T. gondii-ն կարող է գլիոմա առաջացնել փորձարարական կենդանիների մոտ:
Այս ուսումնասիրությունը կենտրոնանում է էկզոսոմային miR-21-ի փոփոխության վրա հյուրընկալող միկրոգլիաներում, որոնք վարակված են Toxoplasma BV2-ով:Մենք նկատեցինք փոփոխված էկզոսոմային miR-21-ի հնարավոր դերը U87 գլիոմայի բջիջների աճի մեջ՝ FoxO1/p27-ի կորիզում պահելու պատճառով, որը գերարտահայտված miR-21-ի թիրախն է:
BV2-ից ստացված էկզոսոմները ստացվել են դիֆերենցիալ ցենտրիֆուգացիայի միջոցով և վավերացվել տարբեր մեթոդներով՝ բջջային բաղադրիչներով կամ այլ վեզիկուլներով աղտոտվածությունը կանխելու համար:SDS-պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը (SDS-PAGE) ցույց տվեց BV2 բջիջներից և էկզոսոմներից արդյունահանվող սպիտակուցների միջև հստակ օրինաչափություններ (Նկար 1Ա), և նմուշները գնահատվել են Alix-ի առկայության համար, որը վերլուծվել է էկզոսոմային սպիտակուցի մարկերների Western blotting-ով:Alix պիտակավորումը հայտնաբերվել է էկզոսոմային սպիտակուցներում, բայց ոչ BV2 բջիջների լիզատ սպիտակուցներում (նկ. 1B):Բացի այդ, BV2-ից ստացված էկզոսոմներից մաքրված ՌՆԹ-ն վերլուծվել է կենսաանալիզատորի միջոցով:18S և 28S ռիբոսոմային ենթամիավորները հազվադեպ են նկատվել էկզոսոմային ՌՆԹ-ի միգրացիայի օրինաչափությունում, ինչը վկայում է հուսալի մաքրության մասին (Նկար 1C):Ի վերջո, փոխանցման էլեկտրոնային մանրադիտակը ցույց տվեց, որ դիտարկված էկզոսոմները ունեին մոտ 60–150 նմ չափսեր և ունեին էկզոսոմների մորֆոլոգիային բնորոշ գավաթանման կառուցվածք (նկ. 1D):
BV2 բջիջներից ստացված էկզոսոմների բնութագրում.(A) Անվտանգության տվյալների թերթիկի էջ:Սպիտակուցները մեկուսացվել են BV2 բջիջներից կամ BV2-ից ստացված էկզոսոմներից:Սպիտակուցի օրինաչափությունները տարբերվում են բջիջների և էկզոսոմների միջև:(Բ) էկզոսոմային մարկերի Western blot վերլուծություն (Alix):(C) BV2 բջիջներից և BV2 ստացված էկզոսոմներից մաքրված ՌՆԹ-ի գնահատում կենսաանալիզատորի միջոցով:Այսպիսով, BV2 բջիջներում 18S և 28S ռիբոսոմային ենթամիավորները հազվադեպ են հայտնաբերվել էկզոսոմային ՌՆԹ-ում:(D) Փոխանցման էլեկտրոնային մանրադիտակը ցույց տվեց, որ BV2 բջիջներից մեկուսացված էկզոսոմները բացասաբար ներկված են 2% ուրանի ացետատով:Էկզոսոմներն ունեն մոտավորապես 60-150 նմ չափսեր և բաժակաձև (Սոնգ և Յունգ, չհրապարակված տվյալներ)։
BV2-ից ստացված էկզոսոմների բջջային ինտերնալիզացիան U87 մարդու գլիոմայի բջիջներում դիտվել է կոնֆոկալ մանրադիտակի միջոցով:PKH26 պիտակավորված էկզոսոմները տեղայնացված են U87 բջիջների ցիտոպլազմայում:Միջուկները ներկվել են DAPI-ով (նկ. 2Ա), ինչը ցույց է տալիս, որ BV2-ից ստացված էկզոսոմները կարող են ներքաշվել հյուրընկալող բջիջների կողմից և ազդել ստացող բջիջների միջավայրի վրա:
BV2-ից ստացված էկզոսոմների ներքինացումը U87 գլիոմայի բջիջներում և BV2-ից ստացված էկզոսոմներ՝ վարակված Toxoplasma RH-ով, առաջացրել է U87 գլիոմա բջիջների տարածում:(A) U87 բջիջներով ընդգրկված էկզոսոմներ, որոնք չափվում են կոնֆոկալ մանրադիտակով:U87 գլիոմայի բջիջները ինկուբացվել են PKH26 (կարմիր) պիտակավորված էկզոսոմներով կամ առանց վերահսկողության 24 ժամվա ընթացքում:Միջուկները ներկվել են DAPI-ով (կապույտ), այնուհետև դիտարկվել են կոնֆոկալ մանրադիտակի տակ (սանդղակ՝ 10 մկմ, x 3000):(B) U87 գլիոմայի բջիջների տարածումը որոշվել է բջիջների տարածման վերլուծությամբ:U87 գլիոմայի բջիջները մշակվել են էկզոսոմներով նշված ժամանակահատվածում: *P <0,05 ստացվել է Student's t թեստով: *P <0,05 ստացվել է Student's t թեստով: *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P <0.05 Student's t-test-ով: *P < 0,05 通过学生t 检验获得。 *P <0,05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0,05 ստացված Student's t-test-ի միջոցով:
BV2-ից ստացված էկզոսոմների ինտերնալիզացիան U87 գլիոմայի բջիջներում հաստատելուց հետո մենք կատարեցինք բջիջների բազմացման փորձարկումներ՝ ուսումնասիրելու BV2-ից ստացված տոքսոպլազմայից ստացված էկզոսոմների դերը մարդու գլիոմայի բջիջների զարգացման մեջ:U87 բջիջների բուժումը T. gondii-ով վարակված BV2 բջիջների էկզոսոմներով ցույց է տվել, որ T. gondii-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմներն առաջացրել են U87 բջիջների զգալիորեն ավելի մեծ տարածում, համեմատած վերահսկողության հետ (նկ. 2B):
Բացի այդ, U118 բջիջների աճը ունեցել է նույն արդյունքները, ինչ U87-ը, քանի որ տոքսոպլազմայի խթանմամբ էկզոսոմները առաջացրել են տարածման ամենաբարձր մակարդակները (տվյալները ցույց չեն տրված):Այս տվյալների հիման վրա մենք կարող ենք նշել, որ BV2-ից ստացված Toxoplasma-ով վարակված էկզոսոմները կարևոր դեր են խաղում գլիոմայի բջիջների տարածման գործում:
Toxoplasma-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմների ազդեցությունը ուռուցքի զարգացման վրա ուսումնասիրելու համար մենք ներարկեցինք U87 գլիոմայի բջիջներ մերկ մկների մեջ քսենոպատվաստային մոդելի համար և ներարկեցինք BV2-ից ստացված էկզոսոմներ կամ RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմներ:Այն բանից հետո, երբ ուռուցքներն ակնհայտ դարձան 1 շաբաթ անց, 5 մկներից բաղկացած յուրաքանչյուր փորձարարական խումբ բաժանվեց ըստ ուռուցքի չափի՝ նույն սկզբնակետը որոշելու համար, և ուռուցքի չափը չափվեց 22 օրվա ընթացքում:
U87 քսենոփոխպատվաստման մոդելով մկների մոտ ուռուցքի զգալիորեն ավելի մեծ չափ և քաշ նկատվել է BV2-ից ստացված RH-ով վարակված էկզոսոմների խմբում 22-րդ օրը (նկ. 3A,B):Մյուս կողմից, BV2-ից ստացված էկզոսոմային խմբի և էկզոսոմային բուժումից հետո վերահսկիչ խմբի միջև ուռուցքի չափի էական տարբերություն չկար:Բացի այդ, մկները, որոնց ներարկվել են գլիոմայի բջիջներ և էկզոսոմներ, տեսողականորեն ցուցադրել են ուռուցքի ամենամեծ ծավալը RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմների խմբում (նկ. 3C):Այս արդյունքները ցույց են տալիս, որ BV2-ից ստացված Toxoplasma-ով վարակված էկզոսոմները հրահրում են գլիոմայի աճ մկների ուռուցքային մոդելում:
BV2-ից ստացված էկզոսոմների օնկոգենեզը (AC) U87 քսենոպատվաստային մկնիկի մոդելում:Ուռուցքի չափը (A) և քաշը (B) զգալիորեն ավելացել են BALB/c մերկ մկների մոտ, որոնք բուժվել են BV2-ից ստացված RH-ով վարակված էկզոսոմներով:BALB/c մերկ մկներին (C) ենթամաշկային ներարկվել են 1 x 107 U87 բջիջներ՝ կախված Matrigel խառնուրդում:Ներարկումից վեց օր հետո մկների մոտ մշակվել է 100 մկգ BV2-ից ստացված էկզոսոմներ:Ուռուցքի չափը և քաշը չափվել են համապատասխանաբար նշված օրերին և զոհաբերությունից հետո: *P <0,05. *P <0,05. *Р < 0,05. *P <0,05. *P <0,05. *P <0,05. *Р < 0,05. *P <0,05.
Տվյալները ցույց են տվել, որ 37 miRNAs (16 գերարտահայտված և 21-ը ցածր արտահայտված), կապված իմունիտետի կամ ուռուցքի զարգացման հետ, զգալիորեն փոխվել են միկրոգլիաներում՝ Toxoplasma RH շտամով վարակվելուց հետո (նկ. 4Ա):MiR-21-ի հարաբերական արտահայտման մակարդակները փոփոխված miRNA-ների միջև հաստատվել են իրական ժամանակի RT-PCR-ով BV2-ից ստացված էկզոսոմներում, BV2 և U87 բջիջներով մշակված էկզոսոմներում:MiR-21-ի արտահայտումը ցույց է տվել Toxoplasma gondii-ով (RH շտամ) վարակված BV2 բջիջներից էկզոսոմների զգալի աճ (նկ. 4B):MiR-21-ի հարաբերական արտահայտման մակարդակները BV2 և U87 բջիջներում աճել են փոփոխված էկզոսոմների կլանումից հետո (նկ. 4B):MiR-21 էքսպրեսիայի հարաբերական մակարդակները ուռուցքային հիվանդների և մկների ուղեղի հյուսվածքներում, որոնք վարակված են Toxoplasma gondii-ով (ME49 շտամ) ավելի բարձր են եղել, քան ստուգիչների մոտ, համապատասխանաբար (նկ. 4C):Այս արդյունքները փոխկապակցված են կանխատեսված և հաստատված միկրոՌՆԹ-ների արտահայտման մակարդակների տարբերությունների հետ in vitro և in vivo:
Էկզոսոմային miP-21a-5p-ի արտահայտման փոփոխություններ Toxoplasma gondii-ով (RH) վարակված միկրոգլիաներում:(A) Ցույց է տալիս զգալի փոփոխություններ siRNA-ում, կապված անձեռնմխելիության կամ ուռուցքի զարգացման հետ T. gondii RH վարակից հետո:(B) MiR-21 արտահայտման հարաբերական մակարդակները հայտնաբերվել են իրական ժամանակի RT-PCR-ի միջոցով BV2-ից ստացված էկզոսոմներում, BV2-ով մշակված էկզոսոմներում և U87 բջիջներում:(C) MiR-21 արտահայտման հարաբերական մակարդակները հայտնաբերվել են ուռուցքային հիվանդների (N=3) և Toxoplasma gondii-ով (ME49 շտամ) վարակված մկների ուղեղի հյուսվածքներում (N=3): *P <0,05 ստացվել է Student's t թեստով: *P <0,05 ստացվել է Student's t թեստով: *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ստացվել է Student's t-test-ի միջոցով: *P < 0,05 通过学生t 检验获得。 *P <0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0,05 ստացված Student's t-test-ի միջոցով:
RH-ով վարակված BV2 բջիջների էկզոսոմները հանգեցրել են գլիոմայի աճին in vivo և in vitro (նկ. 2, 3):Համապատասխան mRNA-ները հայտնաբերելու համար մենք ուսումնասիրեցինք հակաուռուցքային թիրախային գեների mRNA մակարդակները, ճակատային տուփ O1 (FoxO1), PTEN և ծրագրավորված բջիջների մահ 4 (PDCD4) U87 բջիջներում, որոնք վարակված են BV2 կամ RH BV2-ից ստացված էկզոսոմներով:Կենսաինֆորմատիկական վերլուծությունը ցույց է տվել, որ ուռուցքի հետ կապված մի քանի գեներ, ներառյալ FoxO1, PTEN և PDCD4 գեները, ունեն miR-2121,22 կապող վայրեր:Հակաուռուցքային թիրախային գեների mRNA մակարդակները կրճատվել են RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմներում՝ համեմատած BV2-ից ստացված էկզոսոմների հետ (նկ. 5Ա):FoxO1-ը ցույց է տվել նվազեցված սպիտակուցային մակարդակ RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմներում՝ համեմատած BV2-ից ստացված էկզոսոմների հետ (Նկար 5B):Այս արդյունքների հիման վրա մենք կարող ենք հաստատել, որ RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմները նվազեցնում են հակաօնկոգեն գեները՝ պահպանելով դրանց դերը ուռուցքի աճի մեջ:
Toxoplasma RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմները առաջացնում են հակաուռուցքային գեների ճնշում U87 գլիոմայի բջիջներում Toxoplasma RH-ով վարակված BV2-ից ստացված էկզոսոմների միջոցով:(A) FoxO1, PTEN և PDCD4 արտահայտման իրական ժամանակի PCR էկզոսոմներում, որոնք ստացվել են T. gondii RH-ով վարակված BV2-ից՝ համեմատած PBS էկզոսոմների հետ:β-ակտինի mRNA-ն օգտագործվել է որպես հսկիչ:(B) FoxO1-ի արտահայտությունը որոշվել է Western blotting-ով և խտաչափության տվյալները վիճակագրորեն գնահատվել են ImageJ ծրագրի միջոցով: *P <0,05 ստացվել է Student's t թեստով: *P <0,05 ստացվել է Student's t թեստով: *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ստացվել է Student's t-test-ի միջոցով: *P < 0,05 通过学生t 检验获得。 *P <0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0,05 ստացված Student's t-test-ի միջոցով:
Էկզոսոմներում miP-21-ի ազդեցությունը ուռուցքի հետ կապված գենի կարգավորման վրա հասկանալու համար U87 բջիջները տրանսֆեկցվել են miP-21-ի արգելակիչով՝ օգտագործելով Lipofectamine 2000, և բջիջները հավաքվել են փոխպատվաստումից 24 ժամ անց:FoxO1-ի և p27-ի արտահայտման մակարդակները miR-21 ինհիբիտորներով փոխակերպված բջիջներում համեմատվել են BV2-ից ստացված էկզոսոմներով մշակված բջիջների հետ qRT-PCR-ի միջոցով (նկ. 6A,B):MiR-21 ինհիբիտորի փոխակերպումը U87 բջիջների մեջ զգալիորեն նվազեցրեց FoxO1-ի և p27-ի արտահայտումը (Նկար 6):
RH-ով վարակված էկզոսոմային BV2-ից ստացված miP-21-ը փոխեց FoxO1/p27 արտահայտությունը U87 գլիոմայի բջիջներում:U87 բջիջները տրանսֆեկցվել են miP-21 ինհիբիտորով, օգտագործելով Lipofectamine 2000, և բջիջները հավաքվել են տրանսֆեկցիայից 24 ժամ անց:MiR-21 ինհիբիտորներով փոխակերպված բջիջներում FoxO1 և p27 արտահայտման մակարդակները համեմատվել են BV2-ից ստացված էկզոսոմներով բուժվող բջիջների մակարդակների հետ qRT-PCR (A, B) օգտագործմամբ:
Տանտերի իմունային պատասխանից խուսափելու համար Toxoplasma մակաբույծը վերածվում է հյուսվածքային կիստի:Նրանք պարազիտացնում են տարբեր հյուսվածքներ, ներառյալ ուղեղը, սիրտը և կմախքի մկանները, հյուրընկալողի կյանքի ընթացքում և կարգավորում են հյուրընկալողի իմունային պատասխանը:Բացի այդ, նրանք կարող են կարգավորել հյուրընկալող բջիջների բջջային ցիկլը և ապոպտոզը՝ նպաստելով դրանց տարածմանը14,24:Toxoplasma gondii-ն հիմնականում վարակում է հյուրընկալող դենդրիտային բջիջները, նեյտրոֆիլները և մոնոցիտների/մակրոֆագների տոհմը, ներառյալ ուղեղի միկրոգլիան:Toxoplasma gondii-ն հրահրում է M2 ֆենոտիպի մակրոֆագների տարբերակումը, ազդում է վերքերի բուժման վրա պաթոգեն վարակից հետո, ինչպես նաև կապված է հիպերվասկուլյարիզացիայի և գրանուլոմատոզ ֆիբրոզի հետ:Տոքսոպլազմայի վարակի այս վարքային պաթոգենեզը կարող է կապված լինել ուռուցքի զարգացման հետ կապված մարկերների հետ:Toxoplasma-ով կարգավորվող թշնամական միջավայրը կարող է նմանվել համապատասխան նախաքաղցկեղին։Ուստի կարելի է ենթադրել, որ տոքսոպլազմայի վարակը պետք է նպաստի գլխուղեղի ուռուցքների զարգացմանը։Փաստորեն, տոքսոպլազմայի վարակի բարձր ցուցանիշներ են արձանագրվել ուղեղի տարբեր ուռուցքներով հիվանդների շիճուկում:Բացի այդ, Toxoplasma gondii-ն կարող է լինել ևս մեկ քաղցկեղածին էֆեկտոր և գործել սիներգետիկ՝ օգնելու այլ վարակիչ քաղցկեղածինների զարգացնել ուղեղի ուռուցքները:Այս առումով հարկ է նշել, որ P. falciparum-ը և Epstein-Barr վիրուսը սիներգետիկորեն նպաստում են Բուրկիթի լիմֆոմայի ձևավորմանը:
Էկզոսոմների դերը որպես կարգավորիչներ քաղցկեղի հետազոտության ոլորտում լայնորեն ուսումնասիրվել է:Այնուամենայնիվ, էկզոսոմների դերը մակաբույծների և վարակված տանտերերի միջև մնում է վատ ճանաչված:Մինչ այժմ տարբեր կարգավորիչներ, ներառյալ սեկրեցված սպիտակուցները, բացատրել են կենսաբանական գործընթացները, որոնցով նախակենդանիների մակաբույծները դիմադրում են հյուրընկալող հարձակմանը և հավերժացնում վարակը:Վերջերս աճում է այն գաղափարը, որ նախակենդանիների հետ կապված միկրովեզիկուլները և դրանց միկրոՌՆԹ-ները փոխազդում են հյուրընկալող բջիջների հետ՝ ստեղծելով բարենպաստ միջավայր նրանց գոյատևման համար:Հետևաբար, անհրաժեշտ են հետագա ուսումնասիրություններ՝ փոփոխված էկզոսոմային miRNA-ների և գլիոմայի բջիջների տարածման միջև կապը հայտնաբերելու համար:ՄիկրՌՆԹ-ի փոփոխությունը (կլաստերային գեներ miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 և miR-17-92) կապվում է STAT3 պրոմոտորին տոքսոպլազմայով վարակված մարդու մակրոֆագներում, կարգավորվում և առաջացնում է հակա -ապոպտոզ՝ ի պատասխան Toxoplasma gondii վարակի 29:Տոքսոպլազմայի վարակը մեծացնում է miR-17-5p և miR-106b-5p արտահայտվածությունը, որոնք կապված են մի քանի հիպերպրոլիֆերատիվ հիվանդությունների հետ 30:Այս տվյալները ցույց են տալիս, որ հյուրընկալող miRNA-ները, որոնք կարգավորվում են Toxoplasma վարակի միջոցով, կարևոր մոլեկուլներ են մակաբույծների գոյատևման և պաթոգենեզի համար հյուրընկալողի կենսաբանական վարքագծի մեջ:
Փոփոխված miRNA-ները կարող են ազդել տարբեր տեսակի վարքագծի վրա չարորակ բջիջների սկզբնավորման և առաջընթացի ժամանակ, ներառյալ գլիոմաները. աճի ազդանշանների ինքնաբավություն, աճը արգելակող ազդանշանների նկատմամբ անզգայունություն, ապոպտոզի խուսափում, անսահմանափակ վերարտադրողական ներուժ, անգիոգենեզ, ներխուժում և մետաստազներ և բորբոքում:Գլիոմայի դեպքում փոփոխված miRNA-ները հայտնաբերվել են արտահայտման պրոֆիլավորման մի քանի ուսումնասիրություններում:
Ներկայիս ուսումնասիրության մեջ մենք հաստատեցինք miRNA-21 արտահայտման բարձր մակարդակները տոքսոպլազմայով վարակված հյուրընկալող բջիջներում:miR-21-ը ճանաչվել է որպես պինդ ուռուցքներում, ներառյալ գլիոմաներում, ամենահաճախ գերարտահայտվող միկրոՌՆԹ-ներից մեկը, 33 և դրա արտահայտությունը փոխկապակցված է գլիոմայի աստիճանի հետ:Կուտակվող ապացույցները ցույց են տալիս, որ miR-21-ը նոր օնկոգեն է, որը հանդես է գալիս որպես գլիոմայի աճի հակաապոպտոտիկ գործոն և չափազանց արտահայտված է մարդու ուղեղի չարորակ ուռուցքների հյուսվածքներում և պլազմայում:Հետաքրքիր է, որ miR-21-ի ապաակտիվացումը գլիոմայի բջիջներում և հյուսվածքներում հրահրում է բջիջների տարածման արգելակումը կասպազից կախված ապոպտոզի պատճառով:MiR-21 կանխատեսված թիրախների բիոինֆորմատիկ վերլուծությունը բացահայտեց բազմաթիվ ուռուցքային ճնշող գեներ, որոնք կապված են ապոպտոզի ուղիների հետ, ներառյալ ծրագրավորված բջիջների մահը 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN և ճակատային տուփ O1 (FoxO1), miR-2121 կապող տեղամասով:.22.38.
FoxO1-ը, որպես տրանսկրիպցիոն գործոններից մեկը (FoxO), մասնակցում է մարդու քաղցկեղի տարբեր տեսակների զարգացմանը և կարող է կարգավորել ուռուցքային ճնշող գեների արտահայտումը, ինչպիսիք են p21, p27, Bim և FasL40:FoxO1-ը կարող է կապել և ակտիվացնել բջջային ցիկլի ինհիբիտորները, ինչպիսիք են p27-ը՝ ճնշելու բջիջների աճը:Ավելին, FoxO1-ը PI3K/Akt ազդանշանման հիմնական էֆեկտորն է և կարգավորում է բազմաթիվ կենսաբանական գործընթացներ, ինչպիսիք են բջջային ցիկլի առաջընթացը և բջիջների տարբերակումը p2742 տառադարձման ակտիվացման միջոցով:
Եզրափակելով, մենք կարծում ենք, որ էկզոսոմային miR-21-ը, որը ստացվել է տոքսոպլազմայով վարակված միկրոգլիաներից, կարող է կարևոր դեր խաղալ որպես գլիոմայի բջիջների աճի կարգավորիչ (նկ. 7):Այնուամենայնիվ, հետագա ուսումնասիրություններ են անհրաժեշտ՝ էկզոսոմային miR-21-ի, փոփոխված տոքսոպլազմայի վարակի և գլիոմայի աճի միջև ուղղակի կապ գտնելու համար:Ակնկալվում է, որ այս արդյունքները ելակետ կծառայեն տոքսոպլազմայի վարակի և գլիոմայի հաճախականության միջև կապը ուսումնասիրելու համար:
Այս ուսումնասիրության մեջ առաջարկվում է գլիոմայի (ուղեղի) քաղցկեղի առաջացման մեխանիզմի սխեմատիկ դիագրամ:Հեղինակը նկարում է PowerPoint 2019-ում (Microsoft, Redmond, WA):
Այս հետազոտության բոլոր փորձարարական արձանագրությունները, ներառյալ կենդանիների օգտագործումը, համապատասխանել են Սեուլի ազգային համալսարանի Կենդանիների խնամքի և օգտագործողների կոմիտեի ստանդարտ էթիկական ուղեցույցներին և հաստատվել են Սեուլի ազգային համալսարանի բժշկական դպրոցի ինստիտուցիոնալ վերանայման խորհրդի կողմից (IRB համարը SNU- 150715):-2):Բոլոր փորձարարական ընթացակարգերն իրականացվել են ARRIVE-ի առաջարկությունների համաձայն:
BV2 մկան միկրոգլիան և U87 մարդու գլիոմայի բջիջները մշակվել են Dulbecco's Modified Eagle's Medium-ում (DMEM; Welgene, Սեուլ, Կորեա) և Roswell Park Memorial Institute-ի միջավայրում (RPMI; Welgene), համապատասխանաբար, յուրաքանչյուրը պարունակում է 10% պտղի տավարի շիճուկ, 4 մՄլ: գլուտամին, 0,2 մՄ պենիցիլին և 0,05 մՄ ստրեպտոմիցին:Բջիջները մշակվել են 5% CO2 պարունակող ինկուբատորում 37°C ջերմաստիճանում:Մեկ այլ գլիոմայի բջջային գիծ՝ U118, օգտագործվել է U87 բջիջների հետ համեմատելու համար:
T. gondii-ով վարակված RH և ME49 շտամներից էկզոսոմներ առանձնացնելու համար T. gondii տախիզոիտները (RH շտամ) հավաքվել են 6 շաբաթական BALB/c մկների որովայնի խոռոչից, որոնց ներարկել են 3-4 օր առաջ:Տախիզոիտները երեք անգամ լվացվեցին PBS-ով և մաքրվեցին ցենտրիֆուգմամբ 40% Percoll-ում (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43:ME49 շտամի տախիզոիտներ ստանալու համար BALB/c մկներին ներարկվել են 20 հյուսվածքային կիստաներ, իսկ տախիզոիտի փոխակերպումը կիստաներում հավաքվել է որովայնի խոռոչը լվանալով վարակվելուց հետո (PI) 6-8-րդ օրը:PBS-ով վարակված մկներ.ME49 տախիզոիտները աճեցվել են 100 մկգ/մլ պենիցիլինով (Gibco/BRL, Grand Island, NY, ԱՄՆ), 100 մկգ/մլ ստրեպտոմիցին (Gibco/BRL) և 5% պտղի տավարի շիճուկով (Lonza, Walkersville, MD) բջիջներում: .., ԱՄՆ) 37 °C ջերմաստիճանում և 5% ածխածնի երկօքսիդ:Վերո բջիջներում աճեցվելուց հետո ME49 տախիզոիտները երկու անգամ անցել են 25 չափիչ ասեղի միջով, այնուհետև 5 մկմ ֆիլտրով՝ բեկորները և բջիջները հեռացնելու համար:Լվացքից հետո տախիզոիտները կրկին կասեցվել են PBS44-ում:Toxoplasma gondii շտամի ME49 հյուսվածքային կիստաները պահպանվել են վարակված C57BL/6 մկների ուղեղից մեկուսացված կիստաների ներերակային ներարկումով (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Կորեա):ME49-ով վարակված մկների ուղեղը հավաքվել է PI-ից 3 ամիս հետո և մանրադիտակով մանրացվել է կիստաները մեկուսացնելու համար:Վարակված մկները պահվել են Սեուլի ազգային համալսարանի բժշկական դպրոցում հատուկ պաթոգենից զերծ պայմաններում (SPF):
Ընդհանուր ՌՆԹ-ն արդյունահանվել է BV2-ից ստացված էկզոսոմներից, BV2 բջիջներից և հյուսվածքներից՝ օգտագործելով miRNeasy Mini Kit-ը (Qiagen, Hilden, Գերմանիա)՝ համաձայն արտադրողի ցուցումների, ներառյալ էլուացիայի փուլի ինկուբացիոն ժամանակը:ՌՆԹ-ի կոնցենտրացիան որոշվել է NanoDrop 2000 սպեկտրոֆոտոմետրի վրա:ՌՆԹ միկրոզանգվածների որակը գնահատվել է Agilent 2100 բիոանալիզատորի միջոցով (Agilent Technologies, Amstelveen, Նիդեռլանդներ):
DMEM-ը 10% էկզոսոմով աղքատ FBS-ով պատրաստվել է ուլտրակենտրոնացման միջոցով 100,000 գ 16 ժամվա ընթացքում 4°C-ում և զտվել 0,22 մկմ ֆիլտրի միջոցով (Nalgene, Rochester, NY, ԱՄՆ):BV2 բջիջները՝ 5 × 105, աճեցվել են DMEM-ում, որը պարունակում է 10% էկզոսոմից սպառված FBS և 1% հակաբիոտիկներ 37°C ջերմաստիճանում և 5% CO2:24 ժամ ինկուբացիայից հետո բջիջներին ավելացվեցին RH կամ ME49 շտամների տախիզոիտներ (MOI = 10), իսկ չներխուժող մակաբույծները հեռացվեցին մեկ ժամվա ընթացքում և նորից լցվեցին DMEM-ով:BV2 բջիջներից էկզոսոմները մեկուսացվել են փոփոխված դիֆերենցիալ ցենտրիֆուգմամբ, որն ամենաշատ կիրառվող մեթոդն է:Էկզոսոմի գնդիկը նորից կասեցրեք 300 մկլ PBS-ում՝ ՌՆԹ-ի կամ սպիտակուցի վերլուծության համար:Մեկուսացված էկզոսոմների կոնցենտրացիան որոշվել է BCA սպիտակուցի փորձարկման հավաքածուի (Pierce, Rockford, IL, ԱՄՆ) և NanoDrop 2000 սպեկտրոֆոտոմետրի միջոցով:
BV2 բջիջներից կամ BV2-ից ստացված էկզոսոմներից նստվածքները լիզվեցին PRO-PREP™ սպիտակուցի արդյունահանման լուծույթում (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Կորեա) և սպիտակուցները բեռնվեցին Coomassie փայլուն կապույտ ներկված 10% SDS պոլիակրիլամիդ գելերի վրա:Բացի այդ, սպիտակուցները 2 ժամով տեղափոխվել են PVDF մեմբրաններ:Western blots-ը վավերացվել է՝ օգտագործելով Alix հակամարմինը (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, ԱՄՆ)՝ որպես էկզոսոմային մարկեր:Որպես երկրորդական հակամարմին օգտագործվել են HRP-կոնյուգացված այծի հակամկան IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, ԱՄՆ) և LAS-1000 plus լուսարձակող պատկերի անալիզատոր (Fuji Photographic Film, Տոկիո, Ճապոնիա):.Կատարվել է փոխանցման էլեկտրոնային մանրադիտակ՝ էկզոսոմների չափերն ու մորֆոլոգիան ուսումնասիրելու համար։BV2 բջիջներից մեկուսացված էկզոսոմներ (6,40 μg/µl) պատրաստվել են ածխածնային ծածկույթով ցանցերի վրա և բացասաբար ներկվել 2% ուրանի ացետատով 1 րոպեի ընթացքում:Պատրաստված նմուշները դիտարկվել են 80 կՎ արագացնող լարման դեպքում՝ օգտագործելով JEOL 1200-EX II (Տոկիո, Ճապոնիա) ES1000W Erlangshen CCD տեսախցիկով (Gatan, Pleasanton, CA, ԱՄՆ):
BV2-ից ստացված էկզոսոմները ներկվել են PKH26 Կարմիր լյումինեսցենտ կապող հավաքածուի միջոցով (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ԱՄՆ) 15 րոպե սենյակային ջերմաստիճանում:U87 բջիջները՝ 2×105, PKH26 պիտակավորված էկզոսոմներով (կարմիր) կամ առանց էկզոսոմների՝ որպես բացասական հսկողություն, ինկուբացվել են 37°C ջերմաստիճանում 24 ժամ 5% CO2 ինկուբատորում:U87 բջիջների միջուկները ներկվել են DAPI-ով (կապույտ), U87 բջիջները ամրագրվել են 4% պարաֆորմալդեհիդում 15 րոպե 4°C-ում և այնուհետև վերլուծվել Leica TCS SP8 STED CW կոնֆոկալ մանրադիտակային համակարգում (Leica Microsystems, Mannheim, Գերմանիա):դիտելի։
cDNA-ն սինթեզվել է siRNA-ից՝ օգտագործելով Mir-X siRNA առաջին շղթայի սինթեզը և SYBR qRT-PCR հավաքածուն (Takara Bio Inc., Shiga, Ճապոնիա):Իրական ժամանակի քանակական PCR-ն իրականացվել է iQ5 իրական ժամանակի PCR հայտնաբերման համակարգի միջոցով (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) օգտագործելով պրայմերներ և կաղապարներ՝ խառնված SYBR Premix-ով:ԴՆԹ-ն ուժեղացվել է 40 ցիկլի դենատուրացիայի համար 95°C ջերմաստիճանում 15 վրկ և 60°C ջերմաստիճանում 60 վրկ եռացման համար:Յուրաքանչյուր PCR ռեակցիայի տվյալները վերլուծվել են՝ օգտագործելով iQ™5 օպտիկական համակարգի ծրագրաշարի տվյալների վերլուծության մոդուլը (Bio-Rad):Ընտրված թիրախային գեների և β-ակտին/siRNA (և U6) միջև գեների արտահայտման հարաբերական փոփոխությունները հաշվարկվել են ստանդարտ կորի մեթոդով:Օգտագործված այբբենարանների հաջորդականությունները ներկայացված են Աղյուսակ 1-ում:
3 x 104 U87 գլիոմայի բջիջներ ցանվել են 96 ջրանցքի թիթեղներում և խառնվել տոքսոպլազմայով վարակված էկզոսոմների հետ, որոնք ստացվել են BV2-ից (50 մկգ/մլ) կամ BV2-ից ստացված ոչ իմպուլսային էկզոսոմների հետ (50 մկգ/մլ), որպես ստուգիչներ 12, 18 և 36 ժամվա ընթացքում: .Բջիջների տարածման արագությունը որոշվել է օգտագործելով Բջջի հաշվառման հավաքածու-8 (Դոջինդո, Կումամոտո, Ճապոնիա) (Լրացուցիչ նկարներ S1-S3) 46:
5 շաբաթական էգ BALB/c մերկ մկները գնվել են Orient Bio-ից (Seongnam-si, Հարավային Կորեա) և առանձին-առանձին պահվել ստերիլ վանդակներում սենյակային ջերմաստիճանում (22±2°C) և խոնավության (45±15°C):%) սենյակային ջերմաստիճանում (22±2°C) և խոնավության (45±15%)։12-ժամյա լուսային ցիկլը և 12-ժամյա մութ ցիկլը կատարվել են SPF-ի ներքո (Սեուլի ազգային համալսարանի բժշկության կենդանական կենտրոն):Մկները պատահականորեն բաժանվեցին երեք խմբի՝ յուրաքանչյուրը 5 մկների, և բոլոր խմբերին ենթամաշկային ներարկեցին 400 մլ PBS, որը պարունակում էր 1 x 107 U87 գլիոմայի բջիջներ և նվազեցված աճի գործոն BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA):Ուռուցքի ներարկումից վեց օր անց, BV2 բջիջներից ստացված 200 մգ էկզոսոմներ (առանց տոքսոպլազմայի վարակի) ներարկվել են ուռուցքի տեղամաս:Ուռուցք վարակվելուց 22 օր անց յուրաքանչյուր խմբի մկների ուռուցքի չափը չափվում էր շաբաթական երեք անգամ տրամաչափով, իսկ ուռուցքի ծավալը հաշվարկվում էր բանաձևով՝ 0,5×(լայնություն)×2×երկարություն։
ՄիկրՌՆԹ-ի արտահայտման վերլուծություն՝ օգտագործելով miRCURYTM LNA miRNA զանգված, 7-րդ սերունդը ունի, mmu և rno զանգվածներ (EXIQON, Vedbaek, Դանիա), որոնք ընդգրկում են 1119 լավ բնութագրված մկներ՝ 3100 մարդու, մկների և առնետների միՌՆԹ-ի հայտնաբերման զոնդերի մեջ:Այս ընթացակարգի ընթացքում 250-ից 1000 նգ ընդհանուր ՌՆԹ-ն հեռացվել է 5'-ֆոսֆատից՝ հորթի աղիքային ալկալային ֆոսֆատազով մշակմամբ, որին հաջորդում է պիտակավորում Hy3 կանաչ լյումինեսցենտային ներկով:Այնուհետև պիտակավորված նմուշները հիբրիդացվել են՝ բեռնելով միկրոզանգվածային սլայդներ՝ օգտագործելով հիբրիդացման խցիկի հավաքածու (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, ԱՄՆ) և հիբրիդացման սլայդների հավաքածու (Agilent Technologies):Հիբրիդացումն իրականացվել է 16 ժամ 56°C ջերմաստիճանում, այնուհետև միկրոզանգվածները լվացվել են արտադրողի առաջարկություններին համապատասխան:Մշակված միկրոզանգվածի սլայդներն այնուհետև սկանավորվել են Agilent G2565CA միկրոզանգվածային սկաների համակարգի միջոցով (Agilent Technologies):Սկանավորված պատկերները ներմուծվել են Agilent Feature Extraction ծրագրաշարի 10.7.3.1 տարբերակով (Agilent Technologies) և յուրաքանչյուր պատկերի լյումինեսցենտային ինտենսիվությունը քանակականացվել է՝ օգտագործելով փոփոխված Exiqon արձանագրության համապատասխան GAL ֆայլը:Ընթացիկ հետազոտության համար միկրոզանգվածի տվյալները պահվում են GEO տվյալների բազայում GPL32397 մուտքային համարով:
Toxoplasma-ով վարակված RH կամ ME49 շտամների միկրոգլիաներում հասուն էկզոսոմային miRNA-ների արտահայտման պրոֆիլները վերլուծվել են ցանցային տարբեր գործիքների միջոցով:ՄիՌՆԹ-ները, որոնք կապված են ուռուցքի զարգացման հետ, հայտնաբերվեցին miRWalk2.0-ի միջոցով (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) և զտվեցին 8.0-ից բարձր ազդանշանի նորմալացված ինտենսիվությամբ (log2):ՄիՌՆԹ-ների շարքում, տարբերակված արտահայտված miRNA-ները հայտնաբերվել են ավելի քան 1,5 անգամ փոփոխված miRNA-ների ֆիլտրի վերլուծության արդյունքում, որոնք փոխվել են T. gondii-ով վարակված RH կամ ME49 շտամներով:
Բջիջները ցանվել են վեց ջրհորի թիթեղներում (3 x 105 բջիջ/հոր) opti-MEM-ում (Gibco, Carlsbad, CA, USA) օգտագործելով Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA):Տրանսֆեկցված բջիջները մշակվել են 6 ժամ, այնուհետև միջավայրը փոխվել է թարմ ամբողջական միջավայրի:Բջիջները հավաքվել են փոխպատվաստումից 24 ժամ անց:
Վիճակագրական վերլուծությունը հիմնականում իրականացվել է Student's t-test-ի միջոցով Excel ծրագրաշարով (Microsoft, Washington, DC, ԱՄՆ):Փորձարարական կենդանիների վերլուծության համար իրականացվել է երկկողմանի ANOVA՝ օգտագործելով Prism 3.0 ծրագրաշարը (GraphPad Software, La Jolla, CA, ԱՄՆ): P-արժեքները <0,05 համարվել են որպես վիճակագրորեն նշանակալի: P-արժեքները < 0,05 համարվել են որպես վիճակագրորեն նշանակալի: Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P <0,05 արժեքները համարվել են վիճակագրորեն նշանակալի: P 值< 0,05 被认为具有统计学意义։ P 值< 0,05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P <0,05 արժեքները համարվել են վիճակագրորեն նշանակալի:
Այս հետազոտության մեջ օգտագործված բոլոր փորձարարական արձանագրությունները հաստատվել են Սեուլի ազգային համալսարանի բժշկական դպրոցի ինստիտուցիոնալ վերանայման խորհրդի կողմից (IRB համարը SNU-150715-2):
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.Քաղցկեղի գնահատված գլոբալ հաճախականությունը և մահացությունը 2018 թվականին. GLOBOCAN աղբյուրները և մեթոդները:Մեկնաբանություն.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019):
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS An պատկերացում ուղեղի ուռուցքների ռիսկի գործոնների և դրանց թերապևտիկ միջամտությունների վերաբերյալ: Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS An պատկերացում ուղեղի ուռուցքների ռիսկի գործոնների և դրանց թերապևտիկ միջամտությունների վերաբերյալ:Ռաշիդ, Ս., Ռեհման, Կ. և Ակաշ, MS Ուղեղի ուռուցքների և հիմնական թերապևտիկ միջամտությունների ռիսկի գործոնների վերանայում: Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Ուղեղի ուռուցքի ռիսկի գործոնների և թերապևտիկ միջամտությունների խորը ըմբռնում:Ռաշիդ, Ս., Ռեհման, Կ. և Ակաշ, MS Ուղեղի ուռուցքների և հիմնական թերապևտիկ միջամտությունների ռիսկի գործոնների վերանայում:Կենսաբժշկական գիտություն.Դեղագործ.143, 112119 (2021):
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Բակտերիա-վիրուսային փոխազդեցությունները մարդու բերանի խոռոչի մարսողական և կանանց սեռական տրակտի քաղցկեղներում. համաճարակաբանական և լաբորատոր ապացույցների ամփոփում: Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Բակտերիա-վիրուսային փոխազդեցությունները մարդու բերանի խոռոչի մարսողական և կանանց սեռական տրակտի քաղցկեղներում. համաճարակաբանական և լաբորատոր ապացույցների ամփոփում:Kato I., Zhang J. և Sun J. Բակտերիա-վիրուսային փոխազդեցությունները մարդու ստամոքս-աղիքային տրակտի և կանանց սեռական տրակտի քաղցկեղում. համաճարակաբանական և լաբորատոր տվյալների ամփոփում: Կատո, Ի., Չժան, Ջ. և Սուն, Ջ. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Բակտերիա-վիրուսային փոխազդեցությունը մարդու բերանի խոռոչի մարսողության և կանանց վերարտադրողական տրակտում. հայտնի հիվանդությունների գիտության և լաբորատոր ապացույցների ամփոփում:Kato I., Zhang J. և Sun J. Բակտերիա-վիրուսային փոխազդեցությունները մարդու ստամոքս-աղիքային քաղցկեղի և կանանց սեռական օրգանների քաղցկեղի մեջ. համաճարակաբանական և լաբորատոր տվյալների ամփոփում:Քաղցկեղ 14, 425 (2022):
Magon, KL & Parish, JL Վարակումից մինչև քաղցկեղ. Ինչպես են ԴՆԹ-ի ուռուցքային վիրուսները փոխում ընդունող բջիջի կենտրոնական ածխածնի և լիպիդային նյութափոխանակությունը: Magon, KL & Parish, JL Վարակումից մինչև քաղցկեղ. Ինչպես են ԴՆԹ-ի ուռուցքային վիրուսները փոխում ընդունող բջիջի կենտրոնական ածխածնի և լիպիդային նյութափոխանակությունը:Mahon, KL and Parish, JL Կրակ վարակը քաղցկեղին. ինչպես են ԴՆԹ-ի վրա հիմնված ուռուցքային վիրուսները փոխում ընդունող բջջային կենտրոնական ածխածնի և լիպիդային նյութափոխանակությունը: Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢 Magon, KL & Parish, JL Վարակումից մինչև քաղցկեղ. ինչպես են ԴՆԹ-ի ուռուցքային վիրուսները փոխում ընդունող բջիջի կենտրոնական ածխածինը և լիպիդային նյութափոխանակությունը:Mahon, KL and Parish, JL Վարակում է քաղցկեղը. ինչպես են ԴՆԹ-ի ուռուցքային վիրուսները փոխում կենտրոնական ածխածնի և լիպիդային նյութափոխանակությունը ընդունող բջիջներում:Բաց կենսաբանություն.11, 210004 (2021):
Correia da Costa, JM et al.Կատեխոլային էստրոգեններ շիստոսոմների և լյարդի ծակոցների և հելմինտների հետ կապված քաղցկեղի:ճակատ.տաք ներսում.5, 444 (2014):